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实验标志物3经反复硅胶柱层析和SephadexLH-20凝胶柱纯化,得到化合物7(35毫克)和8(26毫克)。
正丁醇部位以氯仿一甲醇梯度洗脱,得到流份实验标志物1~4,其中实验标志物1经反复硅胶柱层析,得到化合物5(51毫克)。
实验标志物4上ODS柱,甲醇一水梯度洗脱,再经SephadexLH-20凝胶柱纯化,得到化合物2(42毫克)、3(57毫克)、4(73毫克)。
既然我觉得它有用,那么我们采用抗肿瘤活性实验法进行实验。
首先,细胞接种用含百分之10胎牛血清的RPMI1640培养液培养MNK-45和SGC一7901,收集对数生长期细胞,消化后调整其悬液浓度,以每孔1×104个细胞接种于96孑L板,每孔200trL。
细胞培养将细胞板放人CO:孵箱中,在37摄氏度、百分之5CO,条件下培养24小时,当细胞达到80%~90%汇合度时,弃去培养基。
接下来,就是细胞给药。
我们将将样品用DMSO溶解后,按200、100、50、25、12.5克/毫升质量浓度加人细胞孔内,重复3批,并另加3孔作为阳性对照(5-氟尿嘧啶)组。
3孔作为DMSO对照组,每孔总体积100止,在酶联免疫检测仪上测定各孑L吸光度,计算细胞抑制率、
公式为抑制率=(1一加药细胞吸光度/对照细胞吸光度)×100%。再采用Logit法计算IC。
然后是实验结果。
结构鉴定分别有化合物1:白色无定形粉末(甲醇)。
化合物2:白色粉末(氯仿),化合物3:针状结晶(甲醇)。化合物4:黄色粉末(甲醇)。化合物5:黄色针晶(甲醇)化合物6:黄色粉末(甲醇),化合物7:无色针状结晶(氯仿),化合物8:白色粉末(甲醇)。
我们这里能够看出,LC与谷甾醇对照品Rf值及颜色一致,混合熔点不下降,故鉴定该化合物为p一谷甾醇。
TLC与胡萝卜苷对照品Rf值及颜色一致,混合熔点不下降,故鉴定该化合物为胡萝卜苷。
还有就是抗肿瘤活性。
根据实验效果显示,山柰酚对MKN-45和SGC-7901的抑制作用较强,IC50分别为48.87。
这个结果,远远高于阳性对照(5-氟尿嘧啶)。
而山柰酚4—甲醚、乌骨藤苷H、I活性较强。
所以,我们能够清楚的得到了结果。
目前,关于乌骨藤提取物抗胃癌活性的报道主要集中在水提物和甾体化合。
而这一次的实验采用人胃癌细胞SGC7901和MKN45,对该植物中分得的化合物进行体外抗肿瘤活性实验,发现黄酮类成分山柰酚对两者均表现出明显的抑制作用。
我这一次的实验表明,其能够通过作用于SGC7901的活性氧代谢途径来诱发细胞溶血,从而产生抗增殖活性。
当然,这一次尚无对MKN45作用机制进行研究,故需要更深入的探索,以期为开发利用乌骨藤提供科学依据。
这项研究,单凭我一个人肯定是难以完成的,所以,我想要……”
还没有等钟医说完,甚至钟医都没有没有表达出什么想法的时候,一个声音急迫的表示了自己的意愿。
“我可以!我真的可以!钟医,我可以帮你,不,我可以给你打下手,进行这些实验标志物的进一步开发。”
杨光毫不犹豫地表达道。看小说,来小燕文学,关闭阅读模式,体验高速阅读!
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